大便隱血（FOB）（亦稱大便潛血）是指消化道少量出血，紅細(xì)胞被消化破壞，糞便外觀無(wú)異常改變，肉眼和顯微鏡下均不能證實(shí)的出血。在臨床消化道惡性腫瘤早期20%的患者可出現(xiàn)隱血試驗(yàn)陽(yáng)性，晚期病人的隱血陽(yáng)性率可達(dá)到90%以上，并且可呈持續(xù)性陽(yáng)性；消化道出血，消化道潰瘍病人糞便隱血試驗(yàn)多呈間斷性陽(yáng)性；痢疾、直腸息肉、痔瘡出血等也可使糞便中出現(xiàn)較多紅細(xì)胞導(dǎo)致隱血試驗(yàn)陽(yáng)性。因此，大便隱血檢查可作為檢測(cè)各種原因所致的消化道出血的重要檢測(cè)試驗(yàn)，是較為有效的方法。
FOB檢測(cè)靶物質(zhì)是大糞中的人血紅蛋白(Hb)。Hb的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，每個(gè)Hb分子由1個(gè)珠蛋白和4個(gè)血紅素(又稱亞鐵原卟啉)組成。Hb分子是由4個(gè)單體構(gòu)成的四聚體。不同Hb分子的珠蛋白的多肽鏈的組成不同。成年人Hb(HbA)的多肽鏈由2條α鏈和2條β鏈構(gòu)成，為α2β2結(jié)構(gòu)。胎兒Hb(HbF)由2條α鏈和2條γ鏈構(gòu)成，為α2γ2結(jié)構(gòu)。出生后不久HbF即被HbFA所取代。每條α鏈含141個(gè)氨基酸殘基，每條β鏈含146個(gè)氨基酸殘基。
為了克服Hb單抗制備中的技術(shù)難題，本公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)，從人紅細(xì)胞制備純化人Hb蛋白，并以此抗原免疫小鼠，經(jīng)過(guò)多年不斷融合，篩選，從幾百個(gè)單克隆雜交瘤細(xì)胞株中成功篩選出2株配對(duì)良好，抗原位點(diǎn)高度保守的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。用其制備的FOB金標(biāo)檢測(cè)試劑產(chǎn)品對(duì)四百多份大便隱血樣本進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示自制Hb單抗具有較高的抗原位點(diǎn)保守性及較強(qiáng)的活性效價(jià)及親和力。

• 稀釋線性

用0.01 M pH7.4 PBS將血紅蛋白凍干粉稀釋成2500 μg/ml至24 ng/ml共15個(gè)濃度梯度，用自制的鼠源抗血紅蛋白單抗（2B8）進(jìn)行膠體金標(biāo)記，用自制的的另一株鼠源血紅蛋白單抗（4G7）包被硝酸纖維素膜，按“雙抗體夾心”金標(biāo)免疫層析檢測(cè)試劑產(chǎn)品的制備工藝并進(jìn)行陰陽(yáng)符合率、穩(wěn)定性及CV值檢測(cè)。結(jié)果顯示：最低檢測(cè)線24 ng/ml，靈敏度高，最大檢測(cè)上限2500 μg/ml，不會(huì)造成假陰性；在24 ng/ml---100 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系（R² = 0.9999），可定量檢測(cè)。

• 臨床對(duì)比

408份大便隱血便樣來(lái)自蘭州大學(xué)第二醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，對(duì)比試劑A（醫(yī)院檢測(cè)用試劑）和對(duì)比試劑B均為國(guó)內(nèi)臨床檢驗(yàn)中使用量較大的FOB金標(biāo)檢測(cè)試劑產(chǎn)品。結(jié)果顯示：自制金標(biāo)檢測(cè)試紙條的陽(yáng)性率為61.3% 高于同類金標(biāo)對(duì)比試劑A（44.4%）和金標(biāo)對(duì)比試劑B（47.5%），結(jié)果見表1和圖2
表1：自制試劑及對(duì)比試劑對(duì)大便隱血樣本檢測(cè)結(jié)果
 

	自制試劑	對(duì)比試劑A	對(duì)比試劑B	圖1：自制試劑及對(duì)比試劑對(duì)大便隱血樣本檢測(cè)陽(yáng)性率
樣本數(shù)	408	408	408
陽(yáng)性	250	181	194
陽(yáng)性率	61.30%	44.40%	47.50%

• 特異性

自制試劑大便隱血（FOB）檢測(cè)試劑檢測(cè)人和不同動(dòng)物血紅蛋白試驗(yàn)，以膠體金定量?jī)x器檢測(cè)的Dr值為參照進(jìn)行比較。
表2 ：Hb單克隆抗體與其他動(dòng)物來(lái)源Hb交叉反應(yīng)結(jié)果

以上實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明：
（1）人Hb抗鼠單抗與其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（牛、豬、羊、雞）Hb抗原沒(méi)有交叉反應(yīng)；
（2）用間接法和雙抗夾心法做的人和其它實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清蛋白交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以判定2B8和4G7特異性較強(qiáng)。
 
參考文獻(xiàn)：
[1] 糞便潛血檢測(cè)定量法在結(jié)直腸癌及其他下消化道出血性疾病中的應(yīng)用分析